冷凍細胞活化

1. 前言:
    1.1   冷凍細胞之活化原則為快速解凍,以避免冰晶對細胞造成傷害。
    1.2   細胞活化後,約需數日,或繼代一至二代,其細胞生長或特性表現才會恢復正常﹙例如產生單株抗體或是其他蛋白質﹚。
2. 材料:
    2.1   恆溫水槽
    2.2   新鮮培養基
    2.3   無菌吸管 / 離心管 / 培養瓶
    2.4   液氮或乾冰容器 
3. 步驟:
    3.1   將新鮮培養基置於 37°C 水槽中回溫(或其他適當之培養溫度),回溫後以 70% ethanol擦拭之,移入無菌操作台內。
    3.2   操作人員應戴防護面罩及手套,自液氮或乾冰容器中取出冷凍管,防止冷凍管可能爆裂之傷害。
    3.3   取出冷凍管,立即放入 37°C 水槽(或其他適當之培養溫度)中快速解凍,輕搖冷凍管使其在 1~3 分鐘內全部融化,以 
            70% ethanol 擦拭保存管外部,移入  無菌操作台內。
   3.4    依據細胞種類和濃度,於無菌操作台內取適量培養基加至適當之培養瓶中,緩慢加入已解凍之細胞懸浮液(一般稀釋比例
            為 1:10~1:15), 與培養基混合均勻後,放入培養箱培養。可另取樣少許解凍細胞懸浮液作存活測試。
   3.5    解凍後是否立即去除冷凍保護劑 (例如 DMSO 或 glycerol),依細胞種類而異。對大多數細胞株而言,不需要立即去除冷
            凍保護劑。若要立即去除,則將解凍之細胞懸浮液加入含有 5~10ml 培養基之離心管內,離心 1,000 rpm、5 分鐘後,
            移去上清液,加入新鮮培養基,混合均勻,放入培養瓶內,置於 適當之培養箱培養。
   3.6    若不需立即去除冷凍保存劑,則在解凍培養隔日後更換培養基即可。
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