培養基配置

1. 粉末培養基配製:
1.1 說明:
1.1.1 若培養基以碳酸氫鈉(sodium bicarbonate)為pH緩衝系統,則需另外添加碳酸氫鈉至培養基中。配製時若將 碳酸氫鈉粉末直接加入培養基中,容易造成pH之誤差,或局部過鹼。因此建議粉末培養基及碳酸氫鈉粉末應分別溶解後才混合, 然後用CO2氣體調整pH,而非用強酸(例如HCl)或強鹼(例如NaOH)。
1.1.2 細胞培養基除了以碳酸氫鈉為pH緩衝系統,亦可使用其他緩衝物質,配製此類培養基則不須添加碳酸氫鈉亦不須使用CO2氣體調整pH。
1.2 材料:
1.2.1 純水(milli-Q 水或二次至三次蒸餾水,水品質非常重要)
1.2.2 粉末培養基
1.2.3 碳酸氫鈉(sodium bicarbonate)
1.2.4 電磁攪拌器
1.2.5 無菌玻璃瓶
1.2.6 0.1或0.2 μm無菌過濾膜
1.2.7 pH meter
1.2.8 真空幫浦
1.2.9 CO2鋼瓶
1.3 步驟(以1升為例):
1.3.1 細胞培養基通常須添加10%血清,為預留此體積,因此粉末培養基之配製體積為900 ml。
1.3.2 取粉末培養基溶於700ml milli-Q水中,攪拌使其溶解。
1.3.3 稱取1.5 g/L 之碳酸氫鈉粉末(一般最終濃度為1.5 g/L,但若有特殊濃度,則依該培養基之需求而加入適當之碳酸氫鈉)溶於200ml milli-Q水中,攪拌使其溶解,然後通入CO2氣體至飽和,約10-30秒。
1.3.4 將溶解且含飽和CO2之碳酸氫鈉溶液加入溶解之液體培養基中混合。混合後溶液之pH應為7.2-7.4,除非pH值偏差太大,否則不需用酸鹼再調整之。若為太鹼,可再通入CO2氣體調整pH。過濾後,一般pH會上升0.1左右。
1.3.5 以0.1或0.2 μm無菌過濾膜過濾培養基,並分裝至已標示之無菌玻璃瓶中,貯存於4℃(血清亦可加入培養基中一起過濾)。
1.3.6 培養基標籤應標示培養基種類、廠牌、貨號(catalog number)、批號(lot number)、配製日期與瓶號。
1.3.7 取樣培養基測試其pH及滲透壓,並檢測生物污染。
1.3.8 細胞培養基應置於2~8℃避光保存。若出現沉澱或過期,則應捨棄不用。實驗進行前放在37℃水槽中溫熱後才使用之。
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