培養基配置

培養基配置

1. 粉末培養基配製：
   1. 說明：
      1. 若培養基以碳酸氫鈉(sodium bicarbonate)為pH緩衝系統，則需另外添加碳酸氫鈉至培養基中。配製時若將 碳酸氫鈉粉末直接加入培養基中，容易造成pH之誤差，或局部過鹼。因此建議粉末培養基及碳酸氫鈉粉末應分別溶解後才混合， 然後用CO2氣體調整pH，而非用強酸（例如HCl）或強鹼（例如NaOH）。
      2. 細胞培養基除了以碳酸氫鈉為pH緩衝系統，亦可使用其他緩衝物質，配製此類培養基則不須添加碳酸氫鈉亦不須使用CO2氣體調整pH。
2. 材料：
   1. 純水(milli-Q 水或二次至三次蒸餾水，水品質非常重要)
   2. 粉末培養基
   3. 碳酸氫鈉(sodium bicarbonate)
   4. 電磁攪拌器
   5. 無菌玻璃瓶
   6. 0.1或0.2 μm無菌過濾膜
   7. pH meter
   8. 真空幫浦
   9. CO2鋼瓶
3. 步驟(以1升為例)：
   1. 細胞培養基通常須添加10%血清，為預留此體積，因此粉末培養基之配製體積為900 ml。
   2. 取粉末培養基溶於700ml milli-Q水中，攪拌使其溶解。
   3. 稱取1.5 g/L 之碳酸氫鈉粉末（一般最終濃度為1.5 g/L，但若有特殊濃度，則依該培養基之需求而加入適當之碳酸氫鈉）溶於200ml milli-Q水中，攪拌使其溶解，然後通入CO2氣體至飽和，約10-30秒。
   4. 將溶解且含飽和CO2之碳酸氫鈉溶液加入溶解之液體培養基中混合。混合後溶液之pH應為7.2-7.4，除非pH值偏差太大，否則不需用酸鹼再調整之。若為太鹼，可再通入CO2氣體調整pH。過濾後，一般pH會上升0.1左右。
   5. 以0.1或0.2 μm無菌過濾膜過濾培養基，並分裝至已標示之無菌玻璃瓶中，貯存於4℃（血清亦可加入培養基中一起過濾）。
   6. 培養基標籤應標示培養基種類、廠牌、貨號(catalog number)、批號(lot number)、配製日期與瓶號。
   7. 取樣培養基測試其pH及滲透壓，並檢測生物污染。
   8. 細胞培養基應置於2~8℃避光保存。若出現沉澱或過期，則應捨棄不用。實驗進行前放在37℃水槽中溫熱後才使用之。