冷凍細胞活化

  1. 前言：
    1. 冷凍細胞之活化原則為快速解凍，以避免冰晶對細胞造成傷害。
    2. 細胞活化後，約需數日，或繼代一至二代，其細胞生長或特性表現才會恢復正常﹙例如產生單株抗體或是其他蛋白質﹚。
  2. 材料：
    1. 恆溫水槽
    2. 新鮮培養基
    3. 無菌吸管 / 離心管 / 培養瓶
    4. 液氮或乾冰容器
  3. 步驟：
    1. 將新鮮培養基置於 37°C 水槽中回溫(或其他適當之培養溫度)，回溫後以 70% ethanol擦拭之，移入無菌操作台內。
    2. 操作人員應戴防護面罩及手套，自液氮或乾冰容器中取出冷凍管，防止冷凍管可能爆裂之傷害。
    3. 取出冷凍管，立即放入 37°C 水槽(或其他適當之培養溫度)中快速解凍，輕搖冷凍管使其在 1~3 分鐘內全部融化，以
      70% ethanol 擦拭保存管外部，移入 無菌操作台內。
    4. 依據細胞種類和濃度，於無菌操作台內取適量培養基加至適當之培養瓶中，緩慢加入已解凍之細胞懸浮液(一般稀釋比例
      為 1:10～1:15)， 與培養基混合均勻後，放入培養箱培養。可另取樣少許解凍細胞懸浮液作存活測試。
    5. 解凍後是否立即去除冷凍保護劑 (例如 DMSO 或 glycerol)，依細胞種類而異。對大多數細胞株而言，不需要立即去除冷
      凍保護劑。若要立即去除，則將解凍之細胞懸浮液加入含有 5~10ml 培養基之離心管內，離心 1,000 rpm、5 分鐘後，
      移去上清液，加入新鮮培養基，混合均勻，放入培養瓶內，置於 適當之培養箱培養。
    6. 若不需立即去除冷凍保存劑，則在解凍培養隔日後更換培養基即可。